Na farbenie rôznych biologických materiálov sa používajú rôzne farbivá. Škvrny reagujú s konkrétnou látkou v biologickej vzorke a dodávajú tejto látke špecifickú farbu. Acetokarmín je farbivo používané na demonštráciu nukleových kyselín v chromozóme. Existuje aj niekoľko ďalších dôvodov, prečo je acetokarmín vhodnejší na farbenie nukleovej kyseliny. Sú diskutované v tomto článku.

Pokryté kľúčové oblasti

1. Čo je škvrna - Definícia, druhy škvŕn 2. Čo je acetokarmín - Definícia, charakteristika, príprava 3. Prečo sa acetokarmín používa v mitotických chromozómových štúdiách - Príprava, použitie acetokarmínu

Kľúčové pojmy: acetokarmín, chromozómy, formaldehyd, hydrolýza, mitotické chromozómové štúdie, škvrny

Čo je farbenie

Farbenie je technika používaná v mikroskopických štúdiách biologických vzoriek na zvýšenie kontrastu biologickej vzorky pod mikroskopom. Zdôrazňuje štruktúry biologického tkaniva, ako sú špecifické bunkové populácie, organely, DNA, proteíny, uhľohydráty a lipidy. Škvrnou môžu byť syntetické chemikálie alebo prírodné chemikálie pochádzajúce z rastlín alebo zvierat. Spôsoby farbenia sú popísané nižšie.

1. Jednoduché zafarbenie - Pri jednorazovom farbení sa používa iba jedno farbenie na poskytnutie jednej farby celej biologickej vzorke.
2. Dvojité zafarbenie - Pri dvojitom farbení sa na farbenie konkrétnych organel alebo konkrétnej oblasti používajú dve škvrny.
3. Viacnásobné farbenie - Pri viacnásobnom farbení sa na špecifické farbenie zložiek, ako sú organely vo vzorke, používajú viac ako dve farbivá.

Čo je acetokarmín

Karmín je základné farbivo pripravené z hmyzu známeho ako Coccus cacti. Acetokarmín sa vyrába zmiešaním karmínu s ľadovou kyselinou octovou. Je to farbivo špecifické pre DNA, ktoré sa používa na vizualizáciu supervinutých chromozómov v rôznych fázach mitózy.

Príprava acetokarmínovej škvrny

1. 10 g karmínu sa rozpustí v 1 litri 45% ľadovej kyseliny octovej.
2. Pridajte hliníkové granule a refluxujte 24 hodín.
3. Prefiltrujte do tmavých fliaš a skladujte pri 4 ° C.
4. Farbenie je možné zintenzívniť pridaním chloridu železitého (pridajte 5 ml 10 % roztoku chloridu železitého na 100 ml % acetokarmínu).

Prečo sa acetokarmínová škvrna používa v mitotických chromozómových štúdiách

Acetokarmín je vo všeobecnosti farbivo používané na jednotlivé farbenie. Farbí jadro aj cytoplazmu. Aby sa farbili chromozómy a aby bola cytoplazma bezfarebná, biologická vzorka by mala byť najskôr ošetrená formaldehydom a potom môže byť hydrolyzovaná HCl pri 60 ° C so správnym časom hydrolyzácie. Nakoniec sa môže liečiť acetokarmínom. Acetokarmín produkuje veľké agregáty farbív v slabo kyslých podmienkach (pH 4-5). Demonštrácia mitózy koreňa cibule farbením acetokarmínom je znázornená na obrázku 1.

Obrázok 1: Mitóza koreňa cibule

Acetokarmín je však mierne toxický ako ostatné farbivá nukleových kyselín, ako je acetoorceín. Je tiež lacnejší ako iné druhy škvŕn.

Záver

Škvrny sa používajú v mikroskopických štúdiách na zvýšenie kontrastu konkrétnych biologických zložiek vo vzorke. Acetokarmín je také farbivo, ktoré sa používa na farbenie nukleovej kyseliny vo vnútri buniek. Pretože acetokarmín špecificky farbí chromozómy okrem cytoplazmy, môže sa použiť na vizualizáciu chromozómov v mitotických štúdiách.

Referencia:

1. „ACETOCARMINE STAINING“. Štátna univerzita v Kansas, K dispozícii tu. 2.J. A. Rattenbury (2009) Špecifické farbenie nukleárnej látky aceto-karmínom, Stain Technology, dostupné tu.

Obrázok so súhlasom:

1. „Mitosis onion root mitosis“ Od staticd-Vlastná práca (CC BY-SA 3.0) cez Commons Wikimedia