The hlavný rozdiel medzi nitrocelulózou a nylonovou membránou je to, že nitrocelulózová membrána má vysokú afinitu k väzbe na proteíny, zatiaľ čo nylonová membrána má vysokú afinitu k väzbe nukleových kyselín. Ďalej hydrofóbne a elektrostatické interakcie viažu makromolekuly na nitrocelulózové membrány, zatiaľ čo iónové, hydrofóbne a elektrostatické interakcie viažu makromolekuly na nylonové membrány

Nitrocelulóza a nylonová membrána sú dva typy membrán, na ktoré sa makromolekuly prenášajú z gélu. Nitrocelulózové membrány je však možné použiť aj na väzbu DNA a RNA.

Afinita, Biodyne A, Biodyne B, Nitrocelulóza, Nukleové kyseliny, Nylon, Veľkosť pórov, Bielkoviny

Čo je nitrocelulózová membrána

Nitrocelulózová membrána je bežnou matricou používanou vo Western blote kvôli vysokej afinite na väzbu na proteíny. Môže sa však použiť na detekciu nukleových kyselín okrem imobilizovaných proteínov a glykoproteínov. K imobilizácii makromolekúl dochádza predovšetkým prostredníctvom hydrofóbnych interakcií. Vodíkové väzby sa vytvárajú aj medzi nitroskupinami membrány a postrannými reťazcami aminokyselín bielkovín. Imobilizácia proteínov bude vysoká pri vysokých koncentráciách soli a nízkych metanoloch.

Obrázok 1: Princíp blot

Nitrocelulózové membrány sú k dispozícii v 100% čistých formách nitrocelulózy s veľkým povrchom, ktorý je rovnomerný. Dostupné predbežné veľkosti sú 0,2 μm a 0,45 μm. Malá veľkosť pórov je lepšia na väzbu s malými proteínmi (<14 kDa). Väzbová a zadržiavacia kapacita proteínov je 80-250 μg/cm². Vopred zostavené membrány sú pripravené na použitie. Jednou z hlavných výhod nitrocelulózových membrán je veľmi nízke pozadie, pretože sa dajú ľahko zablokovať. Podporované nitrocelulózové membrány je možné odstrániť a znova sondovať.

Čo je to nylonová membrána

Nylonová membrána je široko používanou matricou na väzbu nukleových kyselín. Nylonové membrány sú mechanicky pevné ako nitrocelulózové membrány. Dva hlavné typy nylonových membrán používaných pri blotovaní sú Biodyne A a Biodyne B. Veľkosť pórov oboch typov je 0,45 μm. Sú odolné voči teplu a rozpúšťadlám. Tiež sa nezmršťujú, nepraskajú ani sa neroztrhnú. Oba majú nízke pozadie ako nitrocelulózové membrány.

Obrázok 2: Membrána Southern Blot

Podobnosti medzi nitrocelulózou a nylonovou membránou

Rozdiel medzi nitrocelulózou a nylonovou membránou

Definícia

Nitrocelulózová membrána sa týka lepivej membrány používanej na imobilizáciu nukleových kyselín a proteínov pri blotovaní, zatiaľ čo nylonová membrána označuje typ membrány s vysokou pevnosťou a tepelnou odolnosťou používanou na imobilizáciu makromolekúl.

Tvorené

Nitrocelulózové membrány sú vyrobené z nitrovanej celulózy, zatiaľ čo nylonové membrány sú vyrobené z nemodifikovaného alebo pozitívne nabitého nylonu Biodyne A a Biodyne B.

Veľkosť pórov

Veľkosti pórov nitrocelulózových membrán sú 0,2 μm a 0,45 μm, zatiaľ čo veľkosť pórov nylonových membrán je 0,45 μm.

Sila

Nitrocelulózové membrány sú krehké, a preto nie sú opakovane použiteľné, zatiaľ čo nylonové membrány sú mechanicky pevné.

Spôsob prenosu

Elektroforetický prenos sa používa hlavne pri prenose proteínov na nitrocelulózové membrány, zatiaľ čo kapilárny prenos je bežnou praxou pri nylonových membránach.

Afinita

Nitrocelulózové membrány majú vysokú afinitu k proteínu, zatiaľ čo nylonové membrány majú vysokú afinitu k nukleovým kyselinám. Nitrocelulózové membrány môžu byť tiež použité pre nukleové kyseliny.

Blotovanie

Nitrocelulózové membrány sú lepšie pre Western blot, zatiaľ čo nylonové membrány sú lepšie pre južný a severný prenos.

Záväzné interakcie

Hydrofóbne a elektrostatické interakcie viažu makromolekuly na nitrocelulózové membrány, zatiaľ čo iónové, hydrofóbne a elektrostatické interakcie viažu makromolekuly na nylonové membrány.

Kapacita viazania bielkovín

Väzbová kapacita nitrocelulózovej membrány na proteíny je 80-250 μg/cm² zatiaľ čo kapacita väzby nylonovej membrány na proteíny je 150-200 μg/cm².

Záver

Nitrocelulózová membrána je krehká membrána, ktorá sa používa hlavne na imobilizáciu proteínu pri Western blote, zatiaľ čo nylonová membrána je silná membrána, ktorá sa používa hlavne na imobilizáciu nukleových kyselín. Nitrocelulózové membrány viažu molekuly hydrofóbnymi interakciami, zatiaľ čo nylonové membrány viažu molekuly elektrostatickými interakciami. Hlavným rozdielom medzi nitrocelulózou a nylonovou membránou je preto afinita.

Referencia:

1. „Nitrocelulózové membrány pre Western blot | Thermo Fisher Scientific - LK. “ Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, dostupné tu2. „Nylonová membrána Biodyne A, 0,45 m, 8 cm x 12 cm.“ Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, dostupné tu3. „Nylonová membrána Biodyne B, 0,45 m, 8 cm x 12 cm.“ Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, dostupné tu

Obrázok so súhlasom:

1. „Blotová biológia“ od Gbdivers-vlastná práca (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia2. „Membrána Southern blot“ od Bojana Žunara-vlastná práca (CC BY-SA 4.0) prostredníctvom Commons Wikimedia